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快速蛋白質染色劑的操作方式介紹

發布日期: 2022-08-16
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   快速蛋白質染色劑為一種單組分染色劑,可直接對凝膠上分離的蛋白進行染色,用于SDS--PAGE凝膠、非變形PAGE凝膠,或argose膠的快速染色,在清晰背景上產生靈敏度0.5ng以上蛋白質的藍色條帶的經典的技術方法。本方法不需要甲醇、乙醇的固定和脫色。產品即到即用,性能穩定,操作便捷,敏感度高,顯色清晰,重復性好得到非常廣泛的使用。
 
  快速蛋白質染色劑的操作方式:
 
  1.洗滌PAGE電泳膠:去離子水洗滌3次,每次約5min。
 
  電泳結束后,取膠放入約200ml去離子水中,在側擺或水平搖床上搖動5分鐘,棄液體,再重復兩次,共洗滌三次。
 
  注意:本洗滌步驟的目的是為了洗去凝膠中的SDS等干擾物質。如果不能充分去除SDS會導致背景較高。
 
  2.染色:加入約30-50ml快速蛋白質染色劑,染色1小時。
 
  棄去離子水,加入適量的快速蛋白質染色劑(每塊大小約8×8厘米的凝膠需使用約30-50ml),使染色液能覆蓋凝膠,且液面至少高出三個膠的厚度為宜,室溫下在側擺或水平搖床上進行染色,直至蛋白條帶變清晰。
 
  注意:推薦的室溫(20-25℃)染色時間為1小時,實際染色時間可以根據染色效果自行調整,染色至能看到清晰的目標蛋白條帶后,棄染色液,加入適量的去離子水,停止染色反應,然后即可拍照記錄。延長染色時間,不會增加背景顏色。
 
  3.脫色:去離子水至少脫色30分鐘(或者過夜)),脫色的PAGE膠可于去離子水中保存。
 
  如果希望獲得更加清晰的蛋白條帶,可以加入約200ml去離子水室溫洗滌約30分鐘甚至過夜。通過去離子水洗滌可以進一步降低背景,獲得更好的染色效果。