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腺病毒包裝服務的簡要流程
發布日期:
2015-09-15
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腺病毒(adenovirus)是一種無包膜的線狀雙鏈DNA病毒。它的宿主范圍很廣,既可感染分裂細胞,又可感染非分裂細胞。腺病毒包裝服務通過Cre/loxP 獲得重組病毒,這個過程發生在HEK293細胞中,從而避免在細菌中重組。在腺病毒的包裝系統中,腺病毒基因組質粒負責攜帶腺病毒的大部分骨架元件,穿梭質粒負責攜帶外源基因表達盒。兩者共轉染包裝細胞后發生同源重組,攜帶外源基因的病毒基因組被包裝,產生重組的腺病毒顆粒。腺病毒包裝服務的簡要流程:
1、構建表達 siRNA/miRNA 的腺病毒載體
2、采用 PacI 消化純化的質粒。
3、消化好的腺病毒表達載體轉染 293A 細胞,收獲細胞以制備病毒粗提液。
4、將病毒粗提液感染 293A 細胞以擴增病毒。
5、分裝,-80℃保存。