核酸提取類試劑盒采用異硫氰酸胍及表面活性劑聯合裂解細胞技術,添加*的病毒凝集劑,不需要進行仿抽提,可從細胞培養物、血漿、血清、分泌液、腹水、拭子等的樣本中快速提取痕量的病毒或細胞的核酸(DNA和RNA)。 1、取待抽提的血清50μl置于微型離心管中,加入200μl抽提A液,顛倒數次充分混勻;(混勻后室溫放置5分鐘可達到效果)
2、加入250μl抽提B液,顛倒數次充分混勻(混勻后室溫放置10min可達效果),13000rpm離心10min,倒去上清;
3、加入200μl抽提C液,顛倒數次混勻,13000rpm離心5min,吸棄上清(盡量去掉上清);
4、室溫放置或50℃加熱5min晾干,加入25μl樣本稀釋液混懸沉淀物,短暫離心使液體落于管底部,上清液即為提取得到的核酸。
注:對于分泌物或棉拭子,先用適量無菌生理鹽水把拭子上的分泌物洗入離心管中,或者把拭子泡在無菌生理鹽水中,捻動使分泌物分散于液體中,然后高速離心5min后,去除大部分上清,余下的樣本即應用上述步驟抽提核酸。
注意事項:
1、如果抽提的是病毒RNA,即提即用,保存請置于-80℃。
2、抽提A液及抽提B液可根據所用的提取物的量等倍加大用量。
3、抽提A液低溫保存會有絮狀物析出或凝結是正常現象,使用前置于50℃使融化,顛倒混勻,不影響使用。
4、血漿樣本盡管也能直接提取,但先用紅細胞裂解液處理去掉紅細胞,效果將更好。
5、加入樣本稀釋液后仍有部分沉淀不溶解是正常現象,不影響后續實驗。