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磷酸化蛋白檢測試劑盒中磷酸化蛋白的提取方法

發布日期： 2017-09-22
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    磷酸化蛋白檢測試劑盒適用于從各種原代或傳代細胞和各種實體組織，如腦、脊髓、神經結或纖維、脂肪、肝臟、消化道、腎臟、心臟、肌肉、血管、結締組織等哺乳動物組織中提取磷酸化蛋白。提取過程簡單方便，可在1小時內完成。該試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。
    1.提取液制備：每500ul冷的蛋白提取液中加入2ul蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。
    2.取100mg組織樣本剪碎，加入總蛋白提取液，用組織勻漿器勻漿至無明顯肉眼可見固體。
    3.將組織勻漿吸入一預冷的干凈離心管中，在4℃，10000rpm條件下離心5分鐘。
    4.將上清吸入另一預冷的干凈離心管，即可得到磷酸化蛋白。
    5.將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存備用或直接用于下游實驗。